2019-04-15 13:51:03
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?韩国学者Jin-Soo Kim等在BioRxiv上传的文章称,DNA介导的NgAgo蛋白切割的是RNA,而不是DNA。
摘要: 在很多科学家表示不能重复韩春雨NgAgo剪切修饰DNA的工作后,曾经发表来信表示同样无法做到的韩国科学家对NgAgo的进一步研究又有了新的进展。他们在1月20日以预印本的形式公布一篇论文,称NgAgo可以作用于RNA。这一结果有什么意义?其他质疑DNA编辑作用的科学家也看到了NgAgo降低基因表达的作用,但当时只发现不是作用与DNA,不知道是否作用RNA或者蛋白质。而韩国科学家得到RNA是NgAgo作用的靶物。另外,还有其他科学家在寻找作用于DNA的Ago家族的其他同源蛋白。韩春雨的研究在事实上刺激了新的研究。他的研究如何判定?诺维信公司的不肯言明的合作是什么意思?《自然-生物技术》收到什么新的材料、如何判定?还有待事件进一步发展。 DNA介导的NgAgo到底能不能实现基因组编辑?自河北科技大学副教授韩春雨及合作者去年5月率先在《自然-生物技术》(Nature Biotechnology)报告NgAgo-gDNA系统可能是具有巨大潜力的基因编辑工具以来,科学界关于NgAgo是否真的能够进行基因组编辑的讨论就没有停止过。 1月20日,韩国的学者又报道了一篇关于NgAgo的研究。这篇贴在论文预印本网站BioRxiv的文章“利用NgAgo进行依赖DNA的RNA切割”(DNA-dependent RNA cleavage by the Natronobacterium gregoryi Argonaute)称,DNA介导的NgAgo蛋白切割的是RNA,而不是DNA。 NgAgo蛋白切割的是RNA,而不是DNA? 文章显示,韩国国立首尔大学的Jin-Soo Kim课题组通过体外生化实验,发现NgAgo具有DNA依赖的RNA酶活性,并且他们还发现其与NgAgo结合的DNA(gODNs)序列必须与RNA反向互补,而正义DNA(sense DNA)序列则不能引导NgAgo切割靶RNA。也就是说,与NgAgo结合的DNA序列如果与RNA序列相同,则不能引导NgAgo切割靶RNA。 相反,Jin-Soo Kim等人在这个体外生化体系中没有发现NgAgo有切割DNA的活性,这个结果不同于韩春雨之前发表在《自然-生物技术》的NgAgo具有DNA酶活性的结论。 去年8月8日,韩春雨在向质粒共享信息库Addgene提交的详细实验法方法中,提到的EDTA(二价阳离子螯合剂)可能影响NgAgo活性的问题。在这篇论文中,Kim等提供了体外生化证据,但证明的是二价金属离子对于NgAgo的RNA酶活性(而非DNA酶活性)是必须的。 文章作者还做了进一步的实验,测出了gODNs的长度和序列对NgAgo切割RNA效率的影响。实验表明,gODNs长度低于13个核苷酸(nt)则完全不能介导NgAgo的RNA酶活性,而碱基错配会影响NgAgo的酶活性,特别是第5-14nt(5’-3’方向)的碱基最为关键。这些结果与Cas9的DNA酶活性相似,但有意思的是,作者发现NgAgo可以多次循环催化,而Cas9只能使用一次。 Kim等人在BioRxiv上传的论文目前还没有细胞内的实验结果。 几周前,Jin-Soo Kim将文章提交给某学术期刊评审。“评审过程比预想的要长很多,”在给《知识分子》的回复说,Kim说。这是Kim第一次在bioRxiv上报告他们的工作。“24小时内,我们的文章在推特上被转发大约有50多次。”Kim说。 或可解释关于NgAgo的多个报道 Kim等人的这一研究有什么意义呢? 北京大学生命科学学院研究员魏文胜表示,DNA介导的Argonaute切割RNA的研究之前已有报道,Jin-Soo Kim的这一研究如果得到证实,也不是第一次证实DNA介导切割RNA的Argonaute。 例如,2005年,美国洛克菲勒大学的Tomas Tushcl实验室与Dinshaw J。 Patel实验室证实,Ago家族的Aa-Ago具有DNA依赖的RNA内切酶活性,可以在55℃以DNA为介导切割靶RNA。2016年,美国加州大学伯克利分校的Jennifer Doudna实验室发现,Mp-Ago在60℃也有以DNA为介导靶向切割RNA的特性。 “只是NgAgo那么受关注,有必要确定它到底能够做什么。”魏文胜说。 之前有多个实验室向《知识分子》表示,可以重复韩春雨论文中使用NgAgo以后GFP荧光衰减的实验,但未能发现基因编辑现象。 |
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